CONTEXTO: O gene supressor tumoral p16 codifica uma proteína inibidora da quinase ciclina dependente 4(cdk4) que bloqueia a divisão celular na fase G1 do ciclo celular. Alterações neste gene foram relatadas em várias neoplasias, incluindo as leucemias linfoblásticas agudas, principalmente da linhagem T. OBJETIVO: Verificar prováveis alterações do gene p16 em leucemias linfoblásticas agudas em crianças, utilizando o método de reação de polimerase em cadeia - polimorfismo conformacional em fita simples e seqüenciamento direto de nucleotídeos e comparar a sobrevida livre de eventos com a presença ou não de alterações (deleções ou substituições de bases) do gene p16, utilizando o método de Kaplan-Meir e teste log-rank. TIPO DE ESTUDO: Estudo retrospectivo. LOCAL: Departamento de Puericultura e Pediatria da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. PARTICIPANTES: Foram estudadas 56 crianças (16 do sexo feminino e 40 do masculino) com leucemia aguda com idade média de quatro anos. Quarenta pacientes (71,43%) tinham leucemias linfoblásticas agudas de células B, 12 (21,43%) tinham leucemias linfoblásticas agudas de células T e 4 (7,1%) eram bifenotípicas. AMOSTRA: Amostras de DNA foram extraídas de medula óssea obtidas ao diagnóstico e/ou na recaída. Em dois casos de leucemias linfoblásticas agudas de células T, o DNA obtido do líquido céfalo-raquidiano foi analisado. VARIÁVEIS ESTUDADAS: Deleções ou substituições de bases nos éxones 1, 2 e 3 do gene p16 foram determinadas pela reação de polimerase em cadeia - polimorfismo conformacional em fita simples e seqüenciamento de nucleotídeos. A sobrevida livre de eventos foi determinada segundo o método de Kaplan-Meier e teste log-rank para pacientes com gene p16 normal e alterado. RESULTADOS: Em cinco casos (quatro leucemias linfoblásticas agudas pré B CALLA+ e uma leucemia linfoblástica aguda T) foram observadas deleções no éxon 3. Foram verificadas migrações anômalas no polimorfismo conformacional em fita simples em sete casos no éxon 1, seis no éxon 2 e cinco no éxon 3. A confirmação da mutação pelo seqüenciamento direto do DNA ocorreu em quatro casos no éxon 1 e 2 no éxon 2. Foram comparadas as curvas de sobrevida pelo método de Kaplan-Meier e teste log-rank e não se obteve diferença estatisticamente significativa da sobrevida livre de eventos em cinco anos entre os grupos de criança com leucemia linfoblática aguda com p16 normal e alterado e também entre os pacientes com leucemia linfoblástica aguda B com p16 normal e alterado. Não foi possível avaliar pelo método de Kaplan-Meier os pacientes com leucemia linfoblástica aguda T devido ao pequeno número de casos. CONCLUSÕES: Os resultados obtidos, principalmente em relação à freqüência de deleções, foram concordantes com vários autores que sugerem que deleções do gene p16 possam ser eventos iniciais da gênese leucêmica. Tendo em vista o pequeno número de amostras estudadas, não foi possível realizar a correlação entre leucemia linfoblática aguda na infância e as mutações de ponto no gene p16 encontradas neste estudo. Não se obteve significância estatística entre sobrevida livre de eventos e alterações do p16 em leucemia linfoblática aguda pelo método de Kaplan-Meier. A freqüência de alterações do p16 em leucemia linfoblástica aguda B e T foram concordantes com os estudos realizados em alguns centros mundiais. Sugerimos a realização de uma pesquisa multicêntrica com um maior número de casos, principalmente sobre leucemia linfoblástica aguda T, a fim que seja possível traçar um perfil de alterações do gene p16 em crianças brasileiras.

CONTEXT: The p16 tumor suppressor gene encodes a cyclin-dependent kinase 4 inhibitor that blocks cell division during the G1 phase of the cell cycle. Alterations in this gene have been reported for various neoplasia types, including acute lymphoblastic leukemias (ALL), especially T-cell acute lymphoblastic leukemias (ALL). OBJECTIVE: To determine probable alterations in the p16 gene in children with acute lymphoblastic leukemias using the polymerase chain reaction (PCR) and direct DNA sequencing and also to analyze event-free survival (EFS). DESIGN: Retrospective study. SETTING: Department of Child Care and Pediatrics, Faculty of Medicine of Ribeirão Preto, Universidade Federal de São Paulo. PARTICIPANTS: Fifty-six children with ALL (mean age 4 years). Forty (71.43%) had B-cell and 12 (21.43%) had T-cell ALL; 4 (7.1%) were biphenotypic. SAMPLE: DNA samples were extracted from bone marrow upon diagnosis and/or relapse. In 2 T-cell cases, DNA from cerebrospinal fluid (CSF) was analyzed. MAIN MEASUREMENTS: Deletions or nucleotide substitutions in exons 1, 2 and 3 of the p16 gene were determined by PCR and nucleotide sequencing. Event-free survival was determined by the Kaplan-Meyer and log-rank test for patients carrying normal and altered p16. RESULTS: Deletions in exon 3 were observed in five cases. Abnormal migration in PCR was observed in seven cases for exon 1, six for exon 2, and five for exon 3. Mutations in exon 1 were confirmed by direct DNA sequencing in four cases and in exon 2 in two cases. The Kaplan-Meyer survival curves and the log-rank test showed no significant differences in 5-year EFS between children with normal or altered p16, or between patients with B-ALL carrying normal or altered p16 gene. Patients with T-ALL could not be evaluated via Kaplan-Meier due to the small number of cases. CONCLUSIONS: Our results, particularly regarding deletion frequency, agree with others suggesting that deletions in the p16 are initial events in leukemia genesis. The small number of samples did not allow stablishment of correlation between childhood ALL and the p16 point mutations found in our study. Kaplan-Meier analysis revealed no significant correlation between EFS and alterations in ALL. The p16 alterations frequency observed for B and T-ALL agreed with reports from other centers.

CONTEXTO: Os genes supressores tumorais atuam no controle da progressão do ciclo celular. Em neoplasias pediátricas, alguns destes genes podem ser considerados marcadores de diagnóstico ou de recaída, sendo, portanto, prováveis indicadores prognósticos. OBJETIVO: Estudar a inativação do gene p15 em crianças com leucemia linfóide aguda. TIPO DE ESTUDO: Estudo retrospectivo. LOCAL: Laboratório de Biologia Molecular, Departamento de Puericultura e Pediatria, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo. PACIENTES: Foram estudadas 83 crianças e adolescentes com leucemia linfóide aguda, sendo examinadas 83 amostras de medula óssea ao diagnóstico, quatro também na recaída e duas amostras de líquido cefalorraquidiano em dois casos de recaída isolada em sistema nervoso central. VARIÁVEIS ESTUDADAS: Deleção homóloga do gene p15, por reação em cadeia de polimerase-multiplex e triagem para mutação de ponto por reação em cadeia de polimerase-polimorfismo conformacional em fita simples. RESULTADOS: Deleção do exon 2 do gene p15 foi observada em 15 crianças, incluindo um caso apenas na recaída isolada em sistema nervoso central. Nenhum caso de deleção do exon 1 foi verificado, bem como nenhum caso sugestivo de mutação de ponto. Não foi estabelecida associação entre inativação do gene p15 e fatores de riscos clássicos. CONCLUSÃO: De acordo com a literatura, a inativação do gene p15 por deleção do exon 2 em leucemia linfóide aguda encontrada na população estudada pode ser considerada um marcador molecular de diagnóstico ou de recaída. No entanto, não foi observada qualquer correlação entre deleção do gene p15 e indicadores clínicos prognósticos.

CONTEXT: Tumor suppressor genes act on the control of cell cycle progression. In pediatric neoplasias, some of these genes may be considered to be markers for diagnosis or relapse, thus probably representing prognostic indicators. OBJECTIVE: To study the inactivation of the p15 gene in children with acute lymphoblastic leukemia. TYPE OF STUDY: Retrospective study. SETTING: Laboratory of Molecular Biology, Department of Pediatrics, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo. PARTICIPANTS: Eighty-three children and adolescents with acute lymphoblastic leukemia were studied, with the examination of 83 bone marrow samples obtained at diagnosis, four obtained also during relapse, and two cerebrospinal fluid samples obtained from two cases of isolated relapse in the central nervous system. MAIN MEASUREMENTS: Homologous deletion of the p15 gene by multiplex polymerase chain reaction, and screening for point mutations by polymerase chain reaction/single-strand conformational polymorphism. RESULTS: Deletion of exon 2 of the p15 gene was observed in 15 children, including one case in which deletion was only verified during isolated central nervous system relapse. No case of exon 1 deletion, or that was suggestive of point mutations, was observed and no association between p15 gene inactivation and classic risk factors was established. CONCLUSION: According to the literature, inactivation of the p15 gene by deletion of exon 2 in acute lymphoblastic leukemia found in the population studied would be considered to be a molecular marker for diagnosis or relapse. However, no correlation between p15 gene deletion and clinical prognostic indicators was observed.

INTRODUÇÃO: A região CDR-3 da IgH têm sido usada com marcador clonal no estudo de doença residual mínima em crianças com leucemia linfóide aguda. Estudos por Southern blot e reação em cadeia da polimerase têm demonstrado bi/oligoclonalidade em um número variável de casos de leucemia linfóide aguda de linhagem B, o que pode interferir de forma importante na detecção de doença residual mínima. Oligoclonalidade também têm sido associada com pior prognóstico e maior chance de recidiva. OBJETIVOS: Correlacionar bi/oligoclonalidade detectada por reação em cadeia da polimerase em crianças brasileiras portadoras de leucemia linfóide aguda de linhagem B com chance de recaída, imunofenótipo, grupo de risco e sobrevida livre de doença. TIPO DE ESTUDO: Estudo prospectivo de seguimento de pacientes. LOCAL: Serviço de Oncologia Pediátrica do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto- USP. PARTICIPANTES: 47 crianças portadoras de leucemia linfóide aguda de linhagem B TESTE DIAGNÓSTICO: Reação em cadeia da polimerase, utilizando-se primers de consenso para região CDR-3 da IgH (FR3A, LJH e VLJH) para detecção de clonalidade. RESULTADOS: Bi/oligoclonalidade foi encontrada em 15 pacientes (31,9%). Não houve diferença estatística significativa entre os grupos com monoclonalidade e biclonalidade quanto a presença de recidiva (28,1% versus 26,1%) , presença de CALLA+ (81,2% versus 80%) ou grupo de risco (62,5% versus 60%). Sobrevida livre de doença foi similar em ambos os grupos, sem diferença significativa (p: 0,7695). CONCLUSÕES: Concluímos que bi/oligoclonalidade não esteve associada com fatores os analisados neste estudo e que sua detecção em 31,9% dos pacientes pode ser importante no estudo e seguimento de doença residual mínima

CONTEXT: The CDR-3 region of heavy-chain immunoglobulin has been used as a clonal marker in the study of minimal residual disease in children with acute lymphoblastic leukemia. Southern blot and polymerase chain reaction studies have demonstrated the occurrence of bi/oligoclonality in a variable number of cases of B-lineage acute lymphoblastic leukemia, a fact that may strongly interfere with the detection of minimal residual disease. Oligoclonality has also been associated with a poorer prognosis and a higher chance of relapse. OBJECTIVES: To correlate bi/oligoclonality, detected by polymerase chain reaction in Brazilian children with B-lineage acute lymphoblastic leukemia with a chance of relapse, with immunophenotype, risk group, and disease-free survival. DESIGN: Prospective study of patients’ outcome. SETTING: Pediatric Oncology Unit of the University Hospital, Faculty of Medicine of Ribeirão Preto, University of São Paulo. PARTICIPANTS: 47 children with acute lymphoblastic leukemia DIAGNOSTIC TEST: Polymerase chain reaction using consensus primers for the CDR-3 region of heavy chain immunoglobulin (FR3A, LJH and VLJH) for the detection of clonality. RESULTS: Bi/oligoclonality was detected in 15 patients (31.9%). There was no significant difference between the groups with monoclonality and biclonality in terms of the occurrence of a relapse (28.1% versus 26.1%), presence of CALLA+ (81.2% versus 80%) or risk group (62.5% versus 60%). Disease-free survival was similar in both groups, with no significant difference (p: 0.7695). CONCLUSIONS: We conclude that bi/oligoclonality was not associated with the factors investigated in the present study and that its detection in 31.9% of the patients may be important for the study and monitoring of minimal residual disease.

CONTEXTO: Mutações do gene supressor tumoral p53 são observadas como as mais freqüentes alterações em neoplasias humanas em adultos. Em oncologia pediátrica, entretanto, são pouco identificadas. O tumor de Wilms é uma neoplasia renal comum em crianças e associa-se com mutações do gene WT1. A correlação entre tumor de Wilms e alterações do gene p53 não está bem estabelecida, sendo baixa a freqüência tumoral, podendo haver associação com doença em estágio avançado e histologia desfavorável. TIPO DE ESTUDO: Relato de caso. RELATO DE CASO: Foi realizar uma triagem para mutações do gene p53 pelo método de PCR-SSCP e seqüenciamento de DNA nos casos sugestivos de mutação em tumor de Wilms. Avaliação do gene p53 nos exons 5-9 em amostras de DNA extraídos de 10 tumores de Wilms de crianças em diferentes estágios pelo método de PCR-SSCP e seqüenciamento de DNA. Alterações na análise do SSCP foram observadas em duas amostras no exon 8. As prováveis mutações não foram confirmadas pelo seqüenciamento de DNA. A ausência de mutações de ponto do gene p53 observada nas 10 amostras de tumor de Wilms estudadas está de acordo com a literatura, sendo o seqüenciamento de DNA fundamental para a confirmação de possíveis mutações.

CONTEXT: Mutations of the p53 tumor suppressor gene are the most frequent alterations observed in human neoplasias affecting adults. In pediatric oncology, however, they have seldom been identified. Wilms’ tumor is a renal neoplasia commonly occurring in children and is associated with mutations of the WT1 gene. The correlation between Wilms’ tumor and alterations of the p53 gene has not been well established, with a low frequency of mutations having been reported in this type of tumor. Mutation may be associated with advanced stage disease and unfavorable histology. OBJECTIVE: To screen for mutations of the p53 gene by the PCR-SSCP method and DNA sequencing in cases of Wilms’ tumor sug-gestive of mutation. DESIGN: Case Report. CASE REPORT: Evaluations of exons 5-9 of the p53 gene in DNA samples extracted by PCR-SSCP from 10 Wilms’ tumors in children at different stages, and DNA sequencing. Changes in SSCP analy-sis were observed in exon 8 in two samples. The probable muta-tions were not confirmed by DNA sequencing. The absence of point mutations in p53 gene observed in the 10 samples of Wilms’ tumor studied agrees with literature data, with DNA sequencing being of fundamental importance for the confirmation of possible mutations.